Anticorpo Policlonal de Coelho TriMetil-Histona H3-K4 (H3K4me3) – Q16695/P68431 para ChIP-seq & WB

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é uma proteína histona central que, junto com a H2A, H2B e H4, se monta no nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Os nucleossomos compactam o DNA e regulam a sua acessibilidade à maquinaria celular, desempenhando um papel central na transcrição, replicação, reparo e estabilidade cromossômica. Modificações pós-traducionais das histonas, coletivamente conhecidas como "código das histonas", controlam dinamicamente a estrutura da cromatina e a expressão gênica. Referências relacionadas: UniProt Q16695/P68431

A trimetilação da lisina 4 na histona H3 (H3K4me3) é uma marca de promotores gênicos ativos e está intimamente ligada ao início e alongamento da transcrição. Esta modificação é depositada por metiltransferases específicas e removida por desmetilases, servindo como um regulador epigenético crítico no desenvolvimento, diferenciação e doença.

A histona H3 está localizada no núcleo e associada aos cromossomos. Existem múltiplas variantes, incluindo a H3.1 canônica (codificada por vários genes, representada por P68431) e a H3.1t específica de testículo (Q16695). Embora a H3.1 seja expressa de forma ubíqua, a H3.1t é encontrada predominantemente em células testiculares. Referências relacionadas: UniProt Q16695

As caudas N‑terminais das histonas estão sujeitas a uma vasta gama de modificações — acetilação, metilação, fosforilação e muitas outras — que geram um panorama regulatório complexo. Estudos abrangentes de mapeamento catalogaram essas modificações, destacando a natureza combinatória intrincada do código das histonas. Referências relacionadas: PMID:17194708

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB) e dot blot (DB), espera-se uma banda única de aproximadamente 15 kDa. Lisados ricos em histonas (por exemplo, proteínas nucleares de HeLa extraídas com ácido) são recomendados como controles positivos, e o carregamento deve ser normalizado para a H3 total.
• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e ChIP‑seq, otimize as condições de reticulação e sonicação para o tipo celular específico. Inclua locais conhecidos positivos para H3K4Kme3 (por exemplo, promotor do GAPDH) e regiões de controle negativo para validar o enriquecimento.
• Para imuno-histoquímica em secções embebidas em parafina (IHC‑P), a recuperação de antígeno (por exemplo, tampão citrato, pH 6,0) é essencial. Um padrão de coloração predominantemente nuclear deve ser observado, com a intensidade do sinal refletindo a atividade transcricional do tecido.
• Em ELISA e outros ensaios baseados em placas, considere o uso de um peptídeo H3K4 trimetilado como controle positivo e um peptídeo não modificado ou monometilado para confirmar a especificidade da modificação.
• Como com qualquer anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada por titulação em amostras conhecidas positivas. A reatividade cruzada com outras espécies é prevista com base na alta conservação da sequência em vertebrados, mas é aconselhada a validação no sistema de amostra relevante.

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