Anticorpo Monoclonal de Coelho TriMetil-Histona H3-K4 (Q16695 / P68431) para Pesquisa Epigenética & ChIP, WB, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, envolvendo e compactando o DNA em cromatina para restringir a acessibilidade à maquinaria transcricional, de reparo e replicação. Desempenha um papel central na manutenção da estabilidade cromossômica e na regulação da expressão gênica através de uma complexa gama de modificações pós‑traducionais (o "código das histonas"). Referências relacionadas: PMID:17194708
• A proteína canônica H3.1 (codificada por múltiplos genes HIST1H3, SWISS P68431) é expressa de maneira dependente da replicação na maioria dos tipos celulares, enquanto a variante específica do testículo H3.1t (HIST3H3, SWISS Q16695) é predominantemente expressa em células testiculares. Ambas se localizam no núcleo e se associam aos cromossomos durante a divisão celular. Referências relacionadas: Gene/Proteína específica; ver UniProt Q16695/P68431
• A trimetilação na lisina 4 (H3K4me3) é uma marca epigenética fundamental associada a promotores ativos, conformação de cromatina aberta e iniciação transcricional. É depositada por metiltransferases da família COMPASS e reconhecida por proteínas leitoras que facilitam a ativação gênica. Referências relacionadas: PMID:16185088
• H3K4me3 coexiste e interage com outras modificações de histonas (por exemplo, acetilação, fosforilação, metilação em outros resíduos) para ajustar finamente os estados da cromatina. A desregulação desta marca tem sido implicada em câncer, distúrbios do desenvolvimento e disfunção imunológica, tornando-a um biomarcador chave na pesquisa epigenética e no desenvolvimento de IVD.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (um peptídeo sintético trimetilado em torno da K4) foi projetado para conferir alta especificidade para a modificação H3K4me3. Para confirmar a seletividade, considere ensaios de competição com peptídeos ou tratamento com desmetilases de histonas (por exemplo, LSD1) que removem grupos metil.
• Para Western blot (WB), são recomendados protocolos de extração de histonas que enriquecem proteínas nucleares básicas. A banda esperada é de ~15 kDa; verifique a identidade da banda usando controles positivos para H3K4me3.
• Na imunoprecipitação da cromatina (ChIP), valide o enriquecimento em genes alvo conhecidos de H3K4me3 (por exemplo, promotor de GAPDH) por qPCR. Inclua controles de IgG apropriados para avaliar o fundo.
• Para imuno-histoquímica (IHC‑P) e imunofluorescência (IF/ICC), as condições de recuperação de antígeno (citrato pH 6 ou EDTA pH 9) podem influenciar a coloração. Teste uma faixa de diluições em tecidos positivos e negativos.
• Devido à alta conservação da sequência entre espécies, espera-se reatividade cruzada com humanos, camundongos, ratos e outros vertebrados. Valide a detecção no seu sistema de amostra específico antes da análise quantitativa.

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