Anticorpo Monoclonal de Coelho TriMetil-Histona H3-K4 (Q16695/P68431) para ChIP-Seq, CUT&Tag, WB

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

As histonas são proteínas básicas altamente conservadas que servem como componentes centrais dos nucleossomos, as unidades fundamentais da cromatina. A Histona H3 é uma das cinco principais proteínas histônicas envolvidas na estrutura da cromatina em células eucarióticas. Junto com H2A, H2B e H4, forma o octâmero de histonas em torno do qual aproximadamente 147 pares de bases de DNA são enrolados, compactando o genoma e regulando a acessibilidade à maquinaria transcricional.

A dinâmica dos nucleossomos, incluindo modificações pós-traducionais (MPTs) nas caudas das histonas, desempenha um papel crucial na regulação epigenética. A Histona H3 está sujeita a inúmeras modificações, como metilação, acetilação, fosforilação e mais, que constituem coletivamente o "código de histonas" que governa a estrutura da cromatina e a expressão gênica.

Entre essas MPTs, a trimetilação da lisina 4 na histona H3 (H3K4me3) é uma marca de transcrição ativa. É predominantemente encontrada nos promotores de genes ativamente transcritos e está envolvida no recrutamento de complexos de remodelação da cromatina e fatores de transcrição. O anticorpo aqui descrito reconhece especificamente a forma trimetilada de H3K4. Esta modificação é mediada por metiltransferases, como os complexos MLL, e está associada à ativação gênica. Referências relacionadas: PMID:16267050 PMID:16457588 PMID:17194708

A Histona H3.1t (codificada pelo gene H3-4, acesso Q16695) é uma variante específica do testículo da histona H3.1, expressa em células testiculares. A histona H3.1 canônica (acesso P68431) é expressa na maioria dos tecidos e é codificada por múltiplos genes. Ambas as variantes compartilham alta similaridade de sequência e são componentes centrais do nucleossomo.

A localização subcelular é exclusivamente nuclear, associada aos cromossomos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético correspondente à lisina 4 trimetilada da Histona H3 humana. Para aplicações como ChIP-seq, CUT&Tag ou IF, considere incluir um controle negativo usando peptídeo não trimetilado ou um controle de isotipo para confirmar a especificidade.
• Prevê-se que o anticorpo tenha ampla reatividade cruzada devido à alta conservação da cauda N-terminal da H3 entre espécies. No entanto, a validação no sistema experimental relevante é recomendada.
• Para Western blotting, uma banda próxima a 15 kDa correspondente à histona H3 deve ser detectada. Garanta a extração adequada das histonas, especialmente ao analisar estados de metilação.
• Em ensaios de ChIP, a fragmentação ideal da cromatina e a titulação do anticorpo devem ser determinadas empiricamente.
• Para aplicações quantitativas como ELISA ou DB, considere usar uma curva padrão com quantidades conhecidas de peptídeo trimetilado.
• O anticorpo pode ser usado em ensaios multiplexados com outros anticorpos de modificação de histonas para estudar o código de histonas de forma combinatória.

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