Anticorpo policlonal de coelho contra TriMetil-Histona H3-K64 (Q16695/P68431) (WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA)

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossoma, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Os nucleossomos envolvem e compactam o DNA, regulando sua acessibilidade às máquinas celulares necessárias para processos como transcrição, reparo de DNA, replicação de DNA e manutenção da estabilidade cromossômica. As histonas, portanto, desempenham um papel central na organização e função do genoma. A acessibilidade do DNA é controlada dinamicamente por uma complexa série de modificações pós-traducionais (PTMs) nas histonas, frequentemente referidas como código de histona, bem como por atividades de remodelação de nucleossomos.

Duas isoformas são representadas pelas acessões Swiss-Prot Q16695 e P68431. Q16695 (Histona H3.1t, também conhecida como H3t ou H3.4) é uma variante de histona H3 específica de testículo expressa principalmente em células testiculares, onde provavelmente contribui para a reorganização da cromatina durante a espermatogênese. P68431 (Histona H3.1) é uma histona canônica, dependente de replicação, que é amplamente expressa e depositada no DNA recém-sintetizado durante a fase S. Ambas as isoformas compartilham extensa homologia de sequência e estão sujeitas a uma infinidade de PTMs, incluindo metilação, acetilação, fosforilação e outras, que modulam a estrutura e a função da cromatina.

A trimetilação da lisina 64 (K64) é uma marca epigenética específica na cauda da histona H3, embora seus papéis biológicos precisos ainda estejam sendo elucidados. Como outros eventos de metilação de histonas, acredita-se que influencie a expressão gênica servindo como um sítio de ancoragem para proteínas efetoras ou alterando o empacotamento da cromatina.

Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado é um péptido trimetilado sintético correspondente à região em torno da lisina 64 da histona H3 (com base em NP_003520.1). Este design permite o reconhecimento específico do estado trimetilado neste resíduo.
• Para Western blot (WB), considere usar lisados de células inteiras de amostras humanas, de camundongo, de rato ou de outros vertebrados. O peso molecular previsto de ~15 kDa deve ser confirmado sob condições redutoras e desnaturantes.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), métodos de recuperação de antígeno (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor em tampão citrato) podem ser necessários para desmascarar o epítopo. Valide a coloração em tecidos de controle positivo e negativo, levando em consideração a expressão específica de testículo da isoforma H3.1t.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), as condições ideais de fixação e permeabilização devem ser determinadas empiricamente. A ampla reatividade cruzada prevista torna este anticorpo adequado para estudos comparativos multiespécies.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado para detectar péptidos ou proteínas recombinantes de H3-K64 trimetilada. Certifique-se de que as etapas adequadas de bloqueio e lavagem sejam realizadas para minimizar a ligação não específica.

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