Anticorpo Policlonal de Coelho TriMetil-Histona H4-K20 para WB/IHC/IF (P62805)

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

A histona H4 é uma das histonas centrais que constituem o nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Junto com as histonas H2A, H2B e H3, ela forma um octâmero ao redor do qual aproximadamente 147 pares de bases de DNA são enrolados, compactando o genoma no núcleo e regulando a acessibilidade ao DNA. A histona H4 desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A modulação dinâmica da estrutura da cromatina é amplamente alcançada por meio de um conjunto complexo de modificações pós-traducionais (MPTs) nas caudas das histonas, coletivamente denominado "código das histonas". Referências relacionadas: UniProt P62805

A histona H4 está localizada principalmente no núcleo e se associa aos cromossomos. A H4 acetilada também é encontrada no núcleo durante estágios específicos da espermatogênese (espermatídias do passo 11). Referências relacionadas: UniProt P62805

O resíduo de lisina 20 da histona H4 (H4K20) está sujeito a múltiplos estados de metilação, incluindo mono-, di- e trimetilação. A trimetilação de H4K20 (H4K20me3) é uma marca característica da heterocromatina constitutiva e está envolvida no silenciamento genético, resposta ao dano do DNA e regulação do ciclo celular. Essa modificação é regulada dinamicamente por metiltransferases (ex: SUV4-20H1/2) e demetilases. Numerosas outras MPTs em H4 foram identificadas por espectrometria de massa e outras técnicas, destacando a complexidade da regulação das histonas. Referências relacionadas: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente à região de K20 trimetilado da histona H4 humana. Espera-se que este anticorpo reconheça H4K20me3 especificamente, mas a reatividade cruzada com outros estados de metilação de H4 ou H4 não modificado deve ser descartada experimentalmente usando ensaios de competição com peptídeos apropriados ou modelos de knockout/knockdown.
• Para detecção por Western blot (WB), extratos nucleares enriquecidos em histonas ou histonas extraídos por ácido são recomendados como tipo de amostra. Otimize a concentração do anticorpo primário (ex: comece com 1:500–1:2000) e use um conjugado de anticorpo secundário adequado.
• Na imunohistoquímica (IHC-P), a recuperação de antígeno com tampão de citrato (pH 6,0) ou tampão EDTA (pH 8,0) pode melhorar a disponibilidade do epítopo; otimize o método de recuperação empiricamente.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), sugere-se a permeabilização com 0,1–0,5% de Triton X-100 ou digitonina. As condições de fixação (ex: 4% PFA) podem afetar a acessibilidade do epítopo; teste diferentes protocolos.
• Ao usar em ensaios de ELISA ou dot blot (DB), considere o uso de placas bloqueadas com BSA e um sistema de detecção biotinilado para maior sensibilidade.
• Sempre inclua um controle negativo (ex: peptídeo H4 não modificado ou controle de IgG) e valide a especificidade do anticorpo no sistema de amostra relevante usando espectrometria de massa ou outros métodos ortogonais.
• O anticorpo apresenta reatividade cruzada de ampla faixa prevista (Humano, Camundongo, Rato e outros), mas é recomendada a validação para cada espécie de interesse.

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