TrkB Coelho pAb para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q16620

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TrkB

• Codificado pelo gene NTRK2, TrkB (receptor de fatores de crescimento BDNF/NT-3, receptor tirosina quinase neurotrófico tipo 2) é uma receptor tirosina quinase que atua como receptor de alta afinidade para o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e a neurotrofina-4 (NTF4), além de ligar a neurotrofina-3 (NTF3) com menor afinidade (PubMed:15494731, PubMed:7574684). O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, incluindo a TrkB completa com atividade quinásica, a Truncada TrkB-T1 e a TrkB-T-Shc que se liga a Shc. Referências relacionadas: PMID:15494731 PMID:7574684
• Após a dimerização e autofosforilação induzidas pelo ligante, TrkB recruta e ativa efetores downstream como SHC1, FRS2, SH2B1, SH2B2 e PLCG1. Isso aciona a cascata GRB2-Ras-MAPK (diferenciação neuronal e crescimento de neuritos), a via PI3K-AKT1 (crescimento e sobrevivência celular) e a sinalização PLCG1-PKC (plasticidade sináptica).
• Através da PLCG1, TrkB também ativa o NF-kappa-B, promovendo a transcrição de genes de sobrevivência e suprimindo a anoique. Pode mediar a sinalização de cálcio dependente de neurotrofinas em células gliais.
• A localização subcelular inclui a membrana celular, membranas de endossomos/endossomos precoces, projeções axonais e dendríticas, citoplasma perinuclear e densidade pós-sináptica.
• No SNC, TrkB é expressa no córtex cerebral, hipocampo, tálamo, plexo coroide, cerebelo, tronco encefálico e medula espinhal. No SNP, é encontrada nos gânglios cranianos, gânglios da raiz dorsal e nervos sensoriais. TrkB-T1 também é detectada no pâncreas, rim e coração, enquanto TrkB-T-Shc é predominantemente neuronal.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada, formação de pontes dissulfeto e fosforilação de tirosina dependente de ligante. Palavras-chave: glicoproteína, fosfoproteína, quinase, transmembrana, splicing alternativo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre os aminoácidos 32–430 do TrkB humano, correspondentes ao domínio extracelular. Espera-se que essa região reconheça todas as isoformas que compartilham a região extracelular.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto da TrkB completa é de 92 kDa; no entanto, a glicosilação pode causar um desvio da banda para um peso molecular aparente maior. Recomenda-se o uso de SDS-PAGE redutor e membrana de PVDF.
• Em imunofluorescência/ICC e IHC-P, métodos de recuperação de antígeno podem aumentar a detecção, especialmente em tecidos fixados em formalina e embebidos em parafina. Valide o anticorpo em amostras de controle positivo apropriadas (por exemplo, tecido cerebral, linhas de células neuronais) e inclua controles sem anticorpo primário.
• Como se trata de um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada para aplicações quantitativas críticas. Considere usá-lo como anticorpo de captura ou detecção em ELISA com a otimização adequada do pareamento.

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