Ubiquitina Rabbit pAb - P0CG47

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da ubiquitina

• Codificada pelo gene UBB, a poliubiquitina-B é processada em vários monômeros de ubiquitina que podem ser conjugados às proteínas-alvo.
• A ligação covalente da ubiquitina (monoubiquitinação) ou de cadeias de poliubiquitina às proteínas regula diversos processos celulares. Os tipos de ligação das cadeias de poliubiquitina determinam os resultados funcionais: as cadeias ligadas à Lys-48 direcionam os substratos para a degradação proteassomal; as cadeias ligadas à Lys-63 estão envolvidas na endocitose, nas respostas a danos no DNA e na sinalização do NF-kappa-B; as cadeias lineares participam da sinalização celular.
• A conjugação da ubiquitina também pode ocorrer por meio de outras ligações (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33), com funções no reparo do DNA, na degradação associada ao RE, nas respostas ao estresse e na modificação de quinases.
• As cadeias de poliubiquitina livres (não ancoradas) funcionam independentemente na ativação de quinases e na sinalização intracelular.
• A proteína está localizada no citoplasma, no núcleo e na membrana externa das mitocôndrias.
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação e ADP-ribosilação, e a proteína forma ligações isopeptídicas com proteínas-alvo.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à ubiquitina de comprimento completo (1-228); portanto, o anticorpo pode reconhecer tanto a ubiquitina livre quanto os conjugados de ubiquitina. No western blot, a ubiquitina livre é detectada a aproximadamente 26 kDa, enquanto as proteínas poliubiquitinadas aparecem como bandas difusas de alto peso molecular.
• Para WB, considere tratar as células com um inibidor do proteassoma (por exemplo, MG132) para acumular espécies poliubiquitinadas ao analisar a degradação.
• Valide a especificidade com controles negativos apropriados, como o knockdown da ubiquitina mediado por siRNA.
• Para IHC-P, pode ser necessária a recuperação antigênica; otimize a diluição do anticorpo e as condições de detecção utilizando tecidos positivos conhecidos.
• As aplicações em ELISA podem se beneficiar da avaliação tanto de formatos diretos quanto de sanduíche, dependendo do tipo de amostra.

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