Anticorpo Policlonal de Coelho para Ubiquitina para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ubiquitina

• A ubiquitina é codificada pelo gene UBB e produzida como poliubiquitina-B, uma proteína precursora que é processada para gerar monômeros de ubiquitina maduros. A ubiquitina é uma proteína de 76 aminoácidos altamente conservada envolvida na modificação pós-traducional de proteínas alvo.
• A ubiquitina existe covalentemente ligada a outras proteínas ou livre (não ancorada). Quando está ligada covalentemente, ela é conjugada por meio de uma ligação isopeptídica às proteínas alvo, formando monômeros (monoubiquitina) ou cadeias de poliubiquitina ligadas por diferentes resíduos de Lis (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) ou cadeias lineares ligadas pelo Met iniciador.
• Diferentes ligações de cadeias de poliubiquitina determinam resultados celulares distintos: cadeias ligadas a Lys-48 direcionam as proteínas para degradação pelo proteassoma, enquanto as cadeias ligadas a Lys-63 estão envolvidas na endocitose, respostas a danos no DNA e sinalização de NF-kappa-B. Outras ligações (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) participam do reparo do DNA, ERAD, regulação do ciclo celular e modificação de quinases.
• Além das formas conjugadas, as cadeias de poliubiquitina livres não ancoradas também têm papéis de sinalização, como ativar quinases proteicas e modular outras vias de sinalização.
• A ubiquitina se localiza em múltiplos compartimentos subcelulares, incluindo o citoplasma, o núcleo e a membrana externa da mitocôndria, refletindo sua ampla participação nos processos celulares.
• As modificações pós-traducionais da própria ubiquitina incluem fosforilação e ADP-ribosilação, que podem modular sua função. A proteína contém uma ligação isopeptídica e faz parte da via de conjugação Ubl.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende a ubiquitina de comprimento total (aminoácidos 1-228), correspondente ao precursor da poliubiquitina-B. É esperado que este anticorpo policlonal reconheça tanto a ubiquitina livre quanto as proteínas conjugadas com ubiquitina, mas ele também pode detectar cadeias de poliubiquitina. No WB, considere usar condições desnaturantes e redutoras para distinguir a ubiquitina monomérica dos conjugados de poliubiquitina.
• Para IHC-P, a recuperação de antígeno pode melhorar a detecção, e controles adequados (por exemplo, usando amostras de knockdown ou knockout) são recomendados para confirmar a especificidade. O sinal pode ser difuso devido à ampla distribuição da ubiquitina.
• Em IF/ICC, os métodos de fixação e permeabilização devem ser otimizados, pois a localização da ubiquitina varia entre os compartimentos. A co-coloração com marcadores de organelas pode auxiliar na interpretação.
• Os protocolos de ELISA devem incluir curvas padrão com ubiquitina recombinante para quantificar os níveis de ubiquitina livre ou total. Certifique-se de que o anticorpo é validado para o formato de ensaio e o tipo de amostra específicos.
• O anticorpo apresenta reatividade cruzada ampla prevista. Para espécies não humanas, valide a reatividade no sistema de amostra relevante, pois a homologia de sequência é alta, mas pode variar.

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