Anticorpo Policlonado de Coelho contra Vinculina para WB, IF/ICC, ELISA - P18206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Vinculina

• A vinculina é uma proteína de ligação a filamentos de actina (F-actina) que desempenha um papel central tanto na adesão célula-matriz (adesões focais) quanto na adesão célula-célula (junções de adesão).
• Ela potencializa a mecanosensação ao regular a expressão de E-caderina na superfície celular e estabilizar o complexo de E-caderina, contribuindo para a morfologia e a locomoção celular.
• A proteína se localiza em múltiplos sítios subcelulares, incluindo adesões focais, junções de adesão, podossomos, citoesqueleto perinuclear e sarcolema nas células musculares.
• Uma variante de splicing específica do músculo, a metavinculina (MV), surge do splicing alternativo do gene VCL e incorpora um exon adicional, gerando uma isoforma maior com funções exclusivas no músculo cardíaco e liso.
• Modificações pós-traducionais como fosforilação, acetilação e palmitoilação regulam a ativação, o direcionamento e as interações proteicas da vinculina.
• Mutações no gene VCL estão associadas a cardiomiopatias, incluindo cardiomiopatia dilatada (CMD1W) e cardiomiopatia hipertrófica (CMH15), destacando seu papel crítico na integridade do músculo cardíaco.
• A vinculina funciona como um ponto de conexão para inúmeros parceiros de ligação (ex.: talina, α-actinina, paxilina), integrando sinais mecânicos e químicos nos sítios de adesão.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aminoácidos 751–850), que é conservada entre a vinculina e a metavinculina; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça ambas as isoformas, a menos que indicado o contrário.
• Para western blotting, é esperada uma banda próxima a 124 kDa; valide a especificidade usando lisados de linhas celulares humanas, de camundongo ou rato conhecidas por expressar vinculina (ex.: HeLa, NIH/3T3 ou C2C12).
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica, otimize a fixação (ex.: paraformaldeído a 4%) e a permeabilização para preservar as estruturas de adesão focal; a co-coloração com F-actina ou paxilina pode servir como controle positivo.
• Para ELISA, considere um formato direto ou sanduíche; realize experimentos de titulação para determinar as concentrações ideais de revestimento e de anticorpo para o seu placa e sistema de detecção específicos.
• Ao trabalhar com tecidos musculares, esteja ciente que a metavinculina migra em um peso molecular maior e pode apresentar expressão diferencial; inclua controles adequados.

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