mAb de coelho anti-WNK3 - Q9BYP7

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da WNK3

• A WNK3 é uma serina/treonina-proteína quinase da família WNK (With No Lysine), também denominada PRKWNK3. Ela atua como um componente upstream essencial da cascata de quinases WNK-SPAK/OSR1.
• A WNK3 regula a homeostase eletrolítica e a recuperação do volume celular ao fosforilar e ativar as quinases downstream OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK em resposta ao estresse hiperosmótico. Referências relacionadas: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16501604 PMID:22989884
• Em condições hiperosmóticas, a WNK3 funciona como um sensor de aglomeração molecular, sofrendo separação de fases líquido-líquido para formar compartimentos sem membrana que concentram a quinase com seus substratos, promovendo assim uma transdução eficiente do sinal. Referências relacionadas: PMID:36318922
• As quinases OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK ativadas subsequentemente fosforilam cotransportadores de cátions e cloreto: ativando cotransportadores de Na-K-Cl (por exemplo, SLC12A2/NKCC1) e inibindo cotransportadores de K-Cl (por exemplo, SLC12A4/KCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), que juntos mediam o aumento regulatório do volume. Referências relacionadas: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16357011
• A WNK3 também fosforila a WNK4, potencialmente modulando a atividade de NCC (SLC12A3), e pode fosforilar a NEDD4L. Independentemente de sua atividade quinase, a WNK3 pode atuar como uma proteína de suporte para regular negativamente a localização na membrana de canais como KCNJ1 e SLC26A9. Referências relacionadas: PMID:16357011 PMID:17975670 PMID:20525693 PMID:17673510
• A WNK3 aumenta o influxo de cálcio mediado por TRPV5 e TRPV6 ao elevar os níveis de expressão desses canais na membrana por meio de um mecanismo dependente de quinase. Referências relacionadas: PMID:18768590
• A proteína está predominantemente localizada no citoplasma.
• A WNK3 é amplamente expressa no cérebro adulto, pulmão, rim, fígado e pâncreas, bem como em tecidos fetais. A isoforma 1 é específica do cérebro, enquanto a isoforma 3 é específica do rim. Mutações na WNK3 foram associadas à deficiência intelectual.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde a um peptídeo C-terminal (aminoácidos 1700-1800), direcionado a uma região que pode estar bem exposta e ser adequada para detectar a proteína de comprimento total.
• Para Western blotting, considere utilizar um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6–8%) para separar efetivamente a grande proteína WNK3 de 198 kDa e incluir marcadores apropriados de peso molecular.
• A reatividade cruzada do anticorpo com camundongo e rato sugere um epítopo conservado; no entanto, recomenda-se a validação na espécie e no sistema de amostra relevantes.
• O anticorpo é adequado para IHC-P e ELISA, além de WB; recomenda-se otimizar os métodos de recuperação antigênica e as diluições do anticorpo para cada aplicação e tipo de tecido.
• Como a sinalização da WNK3 é ativada sob estresse hiperosmótico, considere pré-tratar as células ou tecidos com estímulos hiperosmóticos (por exemplo, sacarose) para aumentar a detecção de alvos downstream fosforilados ao avaliar a ativação da via.

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