Anticorpo Monoclonal de Coelho ZAP70 para WB, IF-P, ELISA - P43403

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ZAP70

• A tirosina-proteína quinase ZAP-70 (proteína associada à cadeia zeta de 70 kDa, tirosina quinase relacionada a Syk) é codificada pelo gene ZAP70 e existe como isoformas alternativamente processadas.
• Funciona como uma quinase de sinalização essencial na resposta imune adaptativa: regula a ativação, proliferação, diferenciação, motilidade, adesão e expressão de citocinas das células T; também contribui para o desenvolvimento dos timócitos e para a ativação primária de células B.
• Após estímulo do receptor de células T (TCR), a ZAP70 é recrutada para os motivos ITAM fosforilados de CD3E e CD3Z na membrana plasmática, onde é ativada por fosforilação mediada por LCK. A ZAP70 ativada fosforila as proteínas adaptadoras LAT e LCP2, iniciando cascatas de sinalização a jusante. Referências relacionadas: PMID:7509083
• Media a internalização e degradação do complexo TCR ao interagir com a ligase E3 de ubiquitina CBL e as adaptadoras SLA/SLA2, modulando a expressão do TCR na superfície e a duração da sinalização.
• Localização subcelular: citoplasma e membrana celular; transloca-se para a membrana plasmática após o engajamento do TCR.
• Especificidade de tecido: expressa em células T, células natural killer (NK), timócitos precoces e células pro/pré-B.
• Modificações pós-traducionais: fosforilação, acetilação e ubiquitinação regulam sua atividade e estabilidade. Contém domínios SH2 e um domínio quinase. Palavras-chave: estrutura 3D, fosfoproteína, conjugação Ubl, ligação isopeptídica, variante de doença, SCID.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína de fusão recombinante representando os aminoácidos 550-619 dentro do domínio quinase C-terminal do ZAP70 humano. Para Western blot, espere uma banda específica em torno de 70 kDa em linhagens de células T humanas (ex.: Jurkat) ou em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs).
• Para imunofluorescência (IF-P), a permeabilização é necessária para detectar a ZAP70 intracelular e associada à membrana; considere o uso de ativadores de células T para melhorar o sinal.
• Em aplicações de ELISA, valide o desempenho do anticorpo com proteína ZAP70 recombinante ou lisados celulares de amostras de células T relevantes; faça titulação ótima.
• A reatividade cruzada relatada é para humano. Se testar outras espécies, verifique a conservação da sequência da região do imunógeno, particularmente no domínio quinase.

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