Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-HLTF para WB, ELISA - Q14527

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HLTF

• HLTF (Fator de transcrição do tipo helicase) é uma proteína multifuncional que combina atividades de ATPase dependente de DNA, ligase de ubiquitina-proteína E3 e remodelação da cromatina, codificada pelo gene HLTF (também conhecido como HIP116A, RNF80, SMARCA3, SNF2L3, ZBU1). Desempenha papéis críticos na tolerância a danos no DNA, regulação epigenética e transcrição. Referências relacionadas: PMID:18316726 PMID:18719106 PMID:26051180
• Como efetor chave no reparo pós-replicação, o HLTF catalisa a poliubiquitinação ligada a Lisina-63 da PCNA monoubiquitinada na Lisina-164 sob estresse genotóxico, promovendo a troca de modelo sem erros para contornar lesões no DNA. Referências relacionadas: PMID:18316726 PMID:18719106
• O HLTF atua como regulador epigenético ao se ligar à histona H3 trimetilada na Lisina-9 (H3K9me3) e mediar a poliubiquitinação da histona H3 na Lisina-23 (H3K23ub), que serve como sítio de acoplamento para a DNMT1, garantindo assim a manutenção da metilação do DNA acoplada à replicação. Referências relacionadas: PMID:40680746
• Exibe atividade de translocase de dsDNA dependente de ATP sem atividade de helicase clássica, mediando a reversão da forquilha de replicação ao desenrolar e anelar fitas nascentes e parentais para suprimir a síntese de DNA e manter a estabilidade genômica. Referências relacionadas: PMID:1994885
• O HLTF coopera com o MSH2 para resolver estruturas de DNA G-quadruplex (G4), limitando o estresse de replicação e o acúmulo de G4 durante todo o ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:39142279
• Contribui para o reparo por excisão de nucleotídeos ao desalojar oligonucleotídeos contendo lesões usando seu domínio HIRAN, e também pode deslocar DNA fita simples de estruturas de triplex através da translocação dependente de ATP. Referências relacionadas: PMID:26051180 PMID:31960921
• A localização subcelular é predominantemente nuclear e associada a cromossomos, o que é consistente com seus papéis no reparo do DNA e dinâmica da cromatina.
• Expresso em múltiplos tecidos incluindo cérebro, coração, rim, fígado, pulmão, pâncreas, placenta e músculo esquelético. A proteína está sujeita a iniciação alternativa, ligação a ATP, ligação a metais (dedo de zinco), metilação e fosforilação, refletindo sua regulação por múltiplas modificações pós-traducionais.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 900-1009 do HLTF humano, uma região selecionada por sua especificidade e por estar provavelmente acessível em condições desnaturantes. Para WB, considere usar lisados de células completas ou extratos nucleares de linhas celulares humanas, de camundongo ou de rato, pois a reatividade cruzada foi relatada para essas espécies.
• Devido ao grande peso molecular previsto (~114 kDa), garanta a separação adequada da proteína usando porcentagens de gel apropriadas e tempos de transferência estendidos durante o western blotting.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; considere emparelhá-lo com um anticorpo correspondente validado se estiver desenvolvendo um ensaio sanduíche, e otimize as condições de revestimento para o peptídeo sintético ou o alvo recombinante.
• Como o HLTF sofre múltiplas modificações pós-traducionais (ubiquitinação, fosforilação, metilação), podem ser observados desvios de banda; valide a capacidade do anticorpo de detectar formas modificadas no sistema de amostra relevante.

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