Anticorpo Policlonais de Coelho para Acetil-BRD4 (K332) (SWISS O60885) | WB, ELISA - Detecção de Acetilação de BRD4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do BRD4

• BRD4 (proteína 4 contendo bromodomínio) é um leitor de cromatina que reconhece histonas acetiladas, desempenhando um papel central na memória epigenética e regulação da transcrição. Ele permanece associado à cromatina acetilada durante todo o ciclo celular e ajuda a preservar a arquitetura da cromatina para a transcrição gênica pós-mitótica. Durante a intérfase, o BRD4 recruta o complexo P-TEFb para promotores e potenciadores distais, facilitando a fosforilação do CTD da RNA polimerase II e o alongamento transcriptional. Ele também medeia a ativação de NF-kappa-B ao se ligar ao RELA acetilado e regula a transcrição dependente de p53.
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• Uma isoforma do BRD4 funciona como um isolador de cromatina na resposta ao dano no DNA, recrutando a condesina-2 para histonas acetiladas, limitando assim a propagação da fosforilação de H2A.X.
  Referências relacionadas: PMID:23728299

• O BRD4 localiza-se predominantemente no núcleo e se associa à cromatina acetilada e aos cromossomos mitóticos. Sua ligação à cromatina é regulada pelo status de acetilação das histonas, influenciada por sinais como a ativação da via JNK.
  Referências relacionadas: PMID:16109376, PMID:21890894, PMID:25593309

• O BRD4 é expresso ubiquitariamente e está sujeito a extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em múltiplos resíduos de serina (ex.: S470, S484, S488, S492, S494, S498, S499, S503, S601, S1117, S1126, S1201, S1204) e acetilação em K1111. Este anticorpo detecta especificamente a acetilação em Lys332, uma modificação ainda não totalmente caracterizada no UniProt, mas projetada com base no peptídeo imunógeno.
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Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo acetilado sintético que envolve a Lys332 do BRD4 humano, projetado para garantir o reconhecimento específico da forma acetilada. Para Western blot, considere usar extratos nucleares de linhas celulares humanas ou de camundongo e valide a especificidade com ensaios de competição peptídica usando os peptídeos acetilados e não acetilados.
• Para ELISA, o peptídeo acetilado pode servir como antígeno de revestimento. Inclua controles apropriados (peptídeo não acetilado, poços em branco) e otimize as concentrações de revestimento para obter a melhor relação sinal-ruído.
• A reatividade do anticorpo pode depender dos níveis de acetilação, que podem variar com o tratamento celular (ex.: inibidores de HDAC). Considere estimular a acetilação para melhorar a detecção.
• Valide o desempenho do anticorpo na sua matriz de amostra específica; as faixas de concentração inicial recomendadas devem ser determinadas empiricamente.
• Evite ciclos repetidos de congelamento-descongelamento; fracione e armazene a -20°C ou conforme recomendado.

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