Anticorpo Policlonico de Coelho contra SARS-CoV-2 NSP8 para WB, ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Glicoproteína Spike

• A glicoproteína Spike (proteína S, também conhecida como E2, proteína Peplômera) é o principal antígeno de superfície do SARS-CoV-2, essencial para a entrada viral nas células hospedeiras. Ela existe como um homotrímero e é clivada nas subunidades S1 (ligante de receptor) e S2 (fusão de membrana). Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086

• A subunidade S1 se liga a receptores do hospedeiro, principalmente a enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2), iniciando a infecção. Essa ligação desencadeia mudanças conformacionais que levam à fusão da membrana, tanto diretamente na superfície celular quanto após a endocitose. Referências relacionadas: PMID:34561887 PMID:32075877 PMID:32221306 PMID:34903715

• Receptores alternativos, como a neuropilina-1 (NRP1) e NRP2, integrinas ou ASGR1, podem mediar a entrada independente de ACE2, explicando potencialmente o tropismo viral em epitélios olfatórios com baixa expressão de ACE2. Referências relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059

• A clivagem da proteína S no sítio S2/S2' por proteases do hospedeiro, incluindo TMPRSS2 na superfície celular ou catepsina L nos endossomos, é essencial para ativar o maquinário de fusão e liberar o genoma viral no citoplasma. Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616

• Como uma proteína de fusão viral de classe I, a S2 sofre uma mudança conformacional irreversível de um estado pré-fusão para uma estrutura de hairpin pós-fusão, mediada por regiões de repetição heptádica que formam um trímero de hairpins, impulsionando a fusão da membrana. Referências relacionadas: PMID:34561887

• Estudos estruturais revelam que o domínio stalk da S possui dobradiças flexíveis, permitindo liberdade orientacional da cabeça, o que pode facilitar o engajamento do receptor e a evasão imunológica. Referências relacionadas: PMID:32817270

• A proteína Spike está localizada na membrana do vírion, na membrana do compartimento intermediário retículo endoplasmático-Golgi do hospedeiro e na membrana da célula hospedeira. Ela sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo glicosilação e palmitoilación, e é um fator de virulência chave.

• As palavras-chave funcionais principais incluem fixação viral à célula hospedeira, fusão da membrana viral com a membrana do hospedeiro, proteína de envelope viral, membrana da célula hospedeira, inibição da resposta imune inata do hospedeiro, superantígeno e imunoevasão viral.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína de fusão recombinante correspondente aos aminoácidos 1-198 da NSP8 do SARS-CoV-2 (YP_009742615.1). Para Western blot (WB), considere usar controles positivos apropriados, como lisados de células infectadas com SARS-CoV-2 ou NSP8 recombinante. Recomenda-se a otimização da diluição do anticorpo e das condições de detecção.
• Para ELISA, garanta uma adsorção (coating) adequada com o imunógeno ou peptídeos derivados da NSP8 relevantes. Valide o ensaio com controles de soro positivo e negativo. A natureza policlonal pode gerar detecção sensível, mas pode exigir uma titulação cuidadosa para minimizar o fundo.
• Como a reatividade cruzada está confirmada para o SARS-CoV-2, o anticorpo pode detectar a NSP8 de variantes do SARS-CoV-2, mas é recomendado o teste específico para variantes. Considere o mapeamento de epítopos se for necessária uma reatividade precisa.

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